检测原理
高效液相色谱法（贬笔尝颁）是检测地表水、地下水及污水中联苯胺的常用方法。其原理基于水样通过阳离子交换固相萃取柱时，联苯胺被吸附。随后，利用乙酸溶液将联苯胺锁定在柱上，以甲醇淋洗去除杂质，再用氨水甲醇溶液洗脱。洗脱液经浓缩定容后，通过配备荧光检测器的高效液相色谱进行分离检测。检测依据保留时间定性，外标法定量。
实验试剂
盐酸：1.19 g/ml。
冰醋酸：1.05 g/ml。
氨水：0.91 g/ml，优级纯。
氢氧化钠。
硫代硫酸钠。
乙酸铵：色谱纯。
联苯胺：99.6%。
甲醇：液相色谱纯。
乙醇。
乙腈：液相色谱纯。
盐酸溶液：1+1。
甲醇水溶液：1+1。
乙酸铵溶液：0.01 mol/L。称取0.77 g乙酸铵，用水溶解后定容至1 L。
乙酸溶液：3+97。量取3 ml冰醋酸和97 ml水，混匀备用。
氢氧化钠溶液：1 mol/L。称取4 g氢氧化钠，用水溶解后定容至100 ml。
氨水甲醇溶液：5+95。量取5 ml氨水和95 ml甲醇，混匀备用。
联苯胺标准贮备液：1000 ?g/ml。称取0.050 g（精确到0.1 mg）联苯胺于50 ml棕色容量瓶中，用甲醇溶解并定容至标线，转移至内衬聚四氟乙烯垫的螺口棕色试剂瓶中保存。此溶液在4°C以下冷藏、避光可保存1年，也可直接购买市售有证标准溶液。
联苯胺标准中间液：100 ?g/ml。准确移取1.00 ml联苯胺标准贮备液于10 ml棕色容量瓶中，用甲醇稀释定容至标线。此溶液在4°C以下冷藏、避光可保存1年。
联苯胺标准使用液I：10.0 ?g/ml。准确移取1.00 ml联苯胺标准中间液于10 ml棕色容量瓶中，用甲醇水溶液稀释定容至标线。此溶液在4°C以下冷藏、避光可保存3个月，使用前应放至室温并混匀。
联苯胺标准使用液II：1.00 ?g/ml。准确移取1.00 ml联苯胺标准使用液I于10 ml棕色容量瓶中，用甲醇水溶液稀释定容至标线。临用现配。
固相萃取柱：混合型阳离子交换固相萃取柱，填料为苯磺酸化的聚苯乙烯-二乙烯基苯树脂，150 mg/6 ml，或其他等效萃取柱。
滤膜：0.45 ?m聚四氟乙烯滤膜。
氮气：纯度≥99.99%。
检测仪器设备
高效液相色谱仪：配备荧光检测器。
色谱柱：填料粒径为5 ?m，柱长15 cm，内径4.6 mm的C18反相色谱柱，或其他等效色谱柱。
样品瓶：500 ml具磨口塞的棕色细口玻璃瓶或带聚四氟乙烯衬垫的棕色螺纹口玻璃瓶。
微量注射器：10 ?l、50 ?l和100 ?l。
氮吹仪。
超声波清洗仪：输出功率在180 W以上，工作频率为40 kHz。
固相萃取装置。
检测水样采集
采样前向样品瓶中加入硫代硫酸钠，每500 ml样品加入40 mg。采样时，应使样品充满采样瓶，不留液上空间。如果样品的pH不在6-9之"间，用盐酸溶液或氢氧化钠溶液调节pH至6-9。采集的样品应在4°C以下冷藏、避光保存，5天内完成萃取。萃取后的洗脱液在4°C以下冷藏、避光保存，4天内完成分析。
水样的制备
固相萃取柱的活化
将固相萃取柱固定在固相萃取装置上，先用5 ml甲醇以约2 ml/min的流速通过固相萃取柱。在填料暴露于空气之"前，向柱上加5 ml水，待水剩约2 ml时，停止活化。
富集、净化与浓缩
量取150 ml水样置于250 ml锥形瓶中，以约2 ml/min的流速通过活化后的固相萃取柱。水样完全富集后，加入5 ml乙酸溶液，待乙酸溶液完全流出后，加入8 ml甲醇淋洗，待甲醇完全流出后，继续用真空泵抽吸5分钟。用7 ml氨水甲醇溶液洗脱，洗脱液收集到浓缩瓶中。然后将浓缩瓶置于氮吹仪上，在60°C浓缩至1 ml，再用水定容至2.0 ml，混匀后经滤膜过滤到棕色水样瓶中，待测。
空白试样的制备
用实验用水代替水样，按照与试样的制备相同步骤进行空白试样的制备。
具体检测步骤
色谱参考条件
流动相A：乙腈；流动相B：乙酸铵溶液。洗脱程序为等度洗脱，流动相A/流动相B=20/80（V/V），流速：1.0 ml/min；柱温：40°C；激发波长：292 nm，检测波长：395 nm；进样体积：40.0 ?l。
建立校准曲线
分别取适量的联苯胺标准使用液I或联苯胺标准使用液II，用甲醇水溶液稀释，制备至少5个浓度点的标准系列，联苯胺的质量浓度分别为2.00 ?g/L、5.00 ?g/L、10.0 ?g/L、50.0 ?g/L、100 ?g/L、200 ?g/L（此为参考浓度）。按照色谱参考条件，由低浓度到高浓度依次对标准系列溶液进样，以联苯胺的质量浓度（?g/L）为横坐标，对应的色谱峰面积或峰高为纵坐标，建立校准曲线。
水样的测定
被检测水样及空白试样可以按照与校准曲线的建立相同的条件进行试样的测定。
本文标题：地表水、地下水及污水中联苯胺的高效液相色谱法检测
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